Plasma free DNA

Introduction: Standardized pre-analytical blood sample procedures for the analysis of circulating cell-free DNA (ccfDNA) are still not available. Therefore, the present study aimed at evaluating the impact of storage conditions related to different times (24 and 48 h) and temperatures (room temperature (RT) and 4 - 8 °C) on the plasma ccfDNA concentration of blood samples drawn into Cell-Free DNA collection tubes (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany). Materials and methods: Venous blood from 30 healthy individuals was collected into five 8.5 mL Cell-Free DNA Collection Tubes (Roche Diagnostics GmbH) each. Plasma samples were processed at time point of blood collection (tube 1), and after storage under the following conditions: 24 h at RT (tube 2) or 4-8 °C (tube 3), and 48 h at RT (tube 4) or 4 - 8 °C (tube 5). Circulating cell-free DNA concentrations were determined by EvaGreen chemistry-based droplet digital PCR (ddPCR). Results: No statistically significant differences between median (interquartile range) plasma ccfDNA concentrations (ng/mL) at time point of blood collection (3.17 (2.13 – 3.76)) and after storage for 24 h (RT: 3.02 (2.41 – 3.68); 4-8 °C: 3.21 (2.19 – 3.46)) and 48 h (RT: 3.13 (2.10 – 3.76); 4-8 °C: 3.09 (2.19 – 3.50)) were observed (P values from 0.102 – 0.975). Conclusions: No unwanted release of genomic DNA from white blood cells could be detected in plasma samples after tube storage for 24 and 48 h regardless of storage temperature.

Evaluation of dysthyronemia in endocrinological patients

Dysthyronemia is the state of the thyroid gland in which the concentration of thyrotropin (TSH) in circulation is within the reference range, but the concentrations of free or total fractions of thyroid hormones (TH) are outside the reference range. Normal values of TSH and increased values of TH are referred to as hyperthyroxinemia or hypertriiodothyroninemia, while normal values of TSH and decreased values of TH are called hypothyroxinemia or hypotriiodothyroninemia.Thyroid diagnostic tests were carried out at the Institute of Endocrinology, Prague, Czech Republic, in 1999–2009 using the immunoanalytical systems of Roche Diagnostics GmbH, Germany (Elecsys 2010, Modular E170).Hyperthyroxinemia was found in 6.74% of all parallel sets of TSH and free thyroxine (FT4, n=259,590) values. Hypotriiodothyroninemia was observed in 8.48% of all parallel sets of TSH and total triiodothyronine (TT3, n=73,143). The occurrence of hyperthyroxinemia (TSH-FT4) and hypotriiodothyroninemia (TSH-TT3) was >3 times higher than the occurrence of dysthyronemia for the combinations TSH-FT4 (hypothyroxinemia), TSH-TT4 (total thyroxine, n=1996), TSH-FT3 (free triiodothyronine, n=94,090), and TSH-TT3 (hypertrijodthyroninemia), and >5 times higher in comparison with the combinations TSH-FT4-FT3 (n=93,683), TSH-FT4-TT3 (n=72,373), TSH-FT3-TT3 (n=2466), TSH-TT4-TT3 (n=1779), TSH-FT4-TT4 (n=1571), and TSH-FT3-TT4 (n=1466).In light of our patient types, we are assuming that the observed hypotriiodothyroninemia (TSH-TT3, 8.48%) is due to a decreased concentration of thyroid binding globulin in postmenopausal women and that hyperthyroxinemia (TSH-FT4, 6.74%) is caused mainly by endogenous autoantibodies against thyroxine in patients with thyroid autoimmune diseases.

Vergleich zweier Bestimmungsmethoden für Schilddrüsenhormone, Kortisol und Insulin bei der Katze

Zusammenfassung: Gegenstand der Untersuchung: Zwei labordiagnostische Messgeräte und Methoden zur Bestimmung von Schilddrüsenhormonen, Kortisol und Insulin der Katze wurden hinsichtlich Präzision, Richtigkeit und Spezifität getestet und miteinander verglichen. Material und Methoden: Ein Gerät, Beckman Coulter Access®, arbeitet mit der Chemilumineszenz-Technik, das andere, Elecsys® 1010, Firma Roche Diagnostics GmbH, mit der Elektrochemilumineszenz-Technik. Zur Untersuchung gelangte das Serum von 118 (Schilddrüsenhormone, Kortisol) bzw. 115 (Insulin) gesunden und von sechs hyperthyreoten Katzen. Ergebnisse: Die Intraassay-Präzision lag im Fall der Schilddrüsenhormone beim Elecsys® deutlich unter 10%, was beim Access® für fT4, Kortisol und Insulin zutraf. Die Interassay-Präzision rangierte beim Access® im Fall von fT4 und Kortisol, beim Elecsys® bei Gesamt-T4 (TT4), fT4 und Gesamt-T3 (TT3), unter 10%. Bei der Prüfung der Wiederfindung ergaben sich bei beiden Geräten sehr gute bis akzeptable Werte mit Ausnahme des Insulins. Mit dem Elecsys® wurden die Referenzwerte für die Schilddrüsenhormone und Kortisol bestimmt (95%-Perzentil): TT4: 11,14-48,71 nmol/l, fT4: 7,21-38,60 pmol/l, TT3: 0,69-1,59 nmol/l, fT3: 1,04-9,77 pmol/l, Kortisol: 6,89-388,42 nmol/l. Schlussfolgerung: Beide Geräte liefern brauchbare Messergebnisse für die vier Schilddrüsenhormone TT4, TT3, fT4 und fT3 sowie Kortisol im Katzenserum. Hinsichtlich der Insulinbestimmung lieferten beide Geräte keine überzeugenden Resultate. Andere Geräte, die ebenfalls mit der Chemilumineszenzoder der Elektrochemilumineszenz-Technik arbeiten, müssen jeweils hinsichtlich ihrer Fähigkeit beim Einsatz in der Tiermedizin neu getestet werden, da die Affinität bei unterschiedlichen Markern differiert.