Disease-free khasi mandarin (Citrus reticulata Blanco) production using in vitro microshoot tip grafting and its assessment using DAS-ELISA and RT-PCR

2015 ◽  
Vol 189 ◽  
pp. 208-213 ◽  
Author(s):  
Rakesh Sanabam ◽  
Nandeibam Samarjit Singh ◽  
Pratap Jyoti Handique ◽  
Huidrom Sunitibala Devi
Keyword(s):  
Citrus Reticulata ◽  
Rt Pcr ◽  
Citrus Reticulata Blanco ◽  
Disease Free ◽  
Das Elisa

scholarly journals Expressão em Escherichia coli da proteína capsidial do Watermelon mosaic virus e produção de anti-soro

2004 ◽  
Vol 29 (2) ◽  
pp. 215-219 ◽  
Author(s):  
Manuela R. Barbieri ◽  
Murilo G. de Carvalho ◽  
Eunize M. Zambolim ◽  
F. Murilo Zerbini
Keyword(s):  
Escherichia Coli ◽  
Western Blot ◽  
Mosaic Virus ◽  
Watermelon Mosaic Virus ◽  
Rt Pcr ◽  
E Coli ◽  
Das Elisa

Um anti-soro policlonal específico para Watermelon mosaic virus (WMV) foi produzido por meio da imunização de coelhos com proteína capsidial purificada, expressa in vitro em células de Escherichia coli. O gene cp foi amplificado via RT-PCR utilizando oligonucleotídeos específicos, a partir de RNA viral extraído de preparações virais concentradas. O fragmento amplificado foi clonado em pBLUESCRIPT KS+ e completamente seqüenciado para confirmação de sua identidade e integridade. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-A. Plasmídeos recombinantes foram utilizados para a expressão da proteína capsidial em E. coli BL21::DE3. A proteína foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni+-NTA, a partir de proteínas totais extraídas de E. coli. Uma vez purificada, a proteína foi quantificada e utilizada para imunização dos coelhos. O anti-soro foi testado quanto a sua especificidade e sensibilidade em testes de Western blot, DAS-ELISA, imunodifusão e ELISA indireto. Todos os testes demonstraram que o anti-soro produzido a partir da expressão in vitro da proteína capsidial é altamente específico para a detecção do WMV em extratos foliares, não tendo sido observada nenhuma reação heteróloga interespecífica.

scholarly journals Tomato spotted wilt orthotospovirus (TSWV) no se trasmite por semilla de jitomate

2019 ◽  
Vol 10 (6) ◽  
pp. 1449-1455
Author(s):  
Guadalupe Rios Dominguez ◽  
Martha Lidya Salgado Siclán ◽  
Carlos Aguilar Ortigoza ◽  
Jesus Gaudencio Aquíno Martínez ◽  
Jose Francisco Rámirez Davila
Keyword(s):  
Rt Pcr ◽  
Tomato Spotted Wilt ◽  
Das Elisa

A la fecha, se reportan más de 231 virus capaces de ser transmitidos por semilla de manera externa o interna, esta transmisión constituye uno de los factores más importantes en el desarrollo epidemiológico de enfermedades de origen viral de precoz infección. El virus marchitez manchada del tomate tomato spot wilt orthotospovirus (TSWV), Orthotospoviridae) afecta a más de 900 familias de plantas incluyendo solanáceas, su principal transmisión es por insectos vectores como los trips, sin embargo, poco se conoce de su posible transmisión a través de semilla. El objetivo del presente trabajo fue determinar la posible trasmisión del TSWV por semilla de plantas de jitomate infectadas empleando técnicas serológicas y RT-PCR en su detección. Se colectaron frutos de jitomate provenientes de plantas infectadas de manera natural con TSWV previamente analizadas por Das-Elisa y positivas al virus de cuatro regiones del Estado de México. Posteriormente, se extrajeron las semillas de los frutos enfermos, a un grupo se les realizó la detección del virus por Das-Elisa en embrión y testa y el otro grupo de semillas se desarrollaron en cultivo in vitro por 15 días. Una vez obtenidas las plántulas, se llevó a cabo la extracción de ARN y la RT-PCR, usando los oligos específicos a la nucleocápside. Los análisis de embrión, semilla y plántulas in vitro con Das- Elisa y RT-PCR (respectivamente) resultaron ser negativos a TSWV en las muestras tratadas. Al parecer no existe infección por el virus en embrión, testa y plántulas in vitro de jitomate.

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