scholarly journals Protein-Based Fingerprint Analysis for the Identification of Ranae Oviductus Using RP-HPLC

Molecules ◽  
2019 ◽  
Vol 24 (9) ◽  
pp. 1687 ◽  
Author(s):  
Yuanshuai Gan ◽  
Yao Xiao ◽  
Shihan Wang ◽  
Hongye Guo ◽  
Min Liu ◽  
...  

This work demonstrated a method combining reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) with chemometrics analysis to identify the authenticity of Ranae Oviductus. The fingerprint chromatograms of the Ranae Oviductus protein were established through an Agilent Zorbax 300SB-C8 column and diode array detection at 215 nm, using 0.085% TFA (v/v) in acetonitrile (A) and 0.1% TFA in ultrapure water (B) as mobile phase. The similarity was in the range of 0.779–0.980. The fingerprint chromatogram of Ranae Oviductus showed a significant difference with counterfeit products. Hierarchical clustering analysis (HCA) and principal component analysis (PCA) successfully identified Ranae Oviductus from the samples. These results indicated that the method established in this work was reliable.

2020 ◽  
Vol 58 (9) ◽  
pp. 789-795
Author(s):  
Amira M El-Kosasy ◽  
Lobna A Hussein ◽  
Nesma M Mohamed ◽  
Nahla N Salama

Abstract A simple, precise, rapid and accurate reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method was developed and validated for analysis of safinamide mesylate (SAF) in presence of its basic degradate, and co-administered drugs levodopa and ondansetron. The mobile phase consisted of acetonitrile and 20 mM potassium dihyrogen orthophosphate buffer having pH = 5 (40: 60 v/v). Quantification was achieved with ultraviolet detector at 226 nm. The linear range was 0.5–10 μg/mL with mean recovery ± SD of 99.72 ± 1.59. The peak purity of SAF in pharmaceutical preparation spiked with its degradate and co-administered drugs revealed symmetry factor (999.8) within the calculated threshold (>998.1). The suggested method was validated in compliance with the International Conference on Harmonization (ICH) guidelines and statistically compared with the manufacturer HPLC method with no significant difference in terms of accuracy and precision. The assay method was successfully used to estimate SAF in tablets with good percentage recoveries. The high sensitivity (lower than Cmax of the drug 0.65 μg/mL) of the proposed HPLC method enabled the determination of SAF in presence of its basic degradate and co-administered drug, ondansetron in human plasma with acceptable accuracy. The suggested HPLC method could be used in Quality Control (QC) lab for analysis of the studied drug in pharmaceutical preparation.


2018 ◽  
Author(s):  
Πέτρος Μαρτσικάλης

Για την επίτευξη της ιχνηλασιμότητας των πληθυσμών ιριδίζουσας πέστροφας Oncorhynchus mykiss (Walbaum, 1792) στην Ελλάδα υιοθετήθηκε μια διαθεματική προσέγγιση, η οποία ως αλληλένδετους πυλώνες της περιελάμβανε α) την πληθυσμιακή γενετική μελέτη στο μιτοχονδριακό DNA των ιχθύων, β) την ταυτοποίηση και ποσοτικοποίηση των ελεύθερων αμινοξέων στο μυϊκό ιστό των ιχθύων και γ) τη γεωμετρική μορφομετρία του σώματος των ιχθύων, εκφράζοντας ένα αντιπροσωπευτικό δείγμα των εντατικών εκτροφών της ελληνικής επικράτειας. Η ιριδίζουσα πέστροφα αποτελεί μη γηγενές είδος των ευρωπαϊκών εσωτερικών υδάτων. Εξαιτίας όμως του γεγονότος ότι παρουσιάζει αξιοσημείωτα πλεονεκτήματα, όπως είναι η ταχεία αύξηση και η προσαρμοστικότητά της σε ποικίλα ενδιαιτήματα υπό διαφορετικές συνθήκες, εξελίχθηκε σε κυρίαρχο εντατικά εκτρεφόμενο είδος στα εσωτερικά ύδατα της Ελλάδας. Παρά τη σημαντική οικονομική σημασία της, υφίσταται παντελής έλλειψη πληθυσμιακών γενετικών μελετών αναφορικά με την προέλευση των αθρόων εισαγωγών γόνου που έλαβαν χώρα τις προηγούμενες δεκαετίες στον κλάδο της ελληνικής πεστροφοκαλλιέργειας. Για τη διενέργεια της πληθυσμιακής γενετικής μελέτης πραγματοποιήθηκε πέψη τμημάτων του μιτοχονδριακού DNA (mtDNA) που ενισχύθηκαν με την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (Polymerase Chain Reaction-PCR) με τη χρήση περιοριστικών ενζύμων (Restriction Fragment Length Polymorphism-RFLP). Τα τμήματα-στόχοι του mtDNA που πολλαπλασιάστηκαν με την τεχνική της PCR ήταν ολόκληρη η περιοχή του βρόχου εκτόπισης, τα tRNA γονίδια της προλίνης και της θρεονίνης, το κυτόχρωμα β, τα γονίδια ND-5 και ND-6 και τμήμα των γονιδίων ATPάση VI και κυτόχρωμα c οξειδάσης 3 (COIII) περιλαμβάνοντας περισσότερα από 5.500 ζεύγη βάσεων DNA από τα περίπου 16.600 ζεύγη βάσεων που απαρτίζουν το συνολικό mtDNA της ιριδίζουσας πέστροφας. Η ανάλυση της πληθυσμιακής δομής αποκάλυψε ότι οι απλότυποι διακρίνονται σε δύο κεντρικούς κλάδους. Η συνύπαρξη απλότυπων και από τους δύο κλάδους σε όλους τους πληθυσμούς ενδέχεται να υποδηλώνει την ύπαρξη κοινής γονιδιακής δεξαμενής. Επίσης, η συνολική γενετική ποικιλότητα οφειλόταν σε σημαντικό βαθμό στην ύπαρξη ποικιλότητας ενδοπληθυσμιακά παρά στην ύπαρξη ποικιλότητας ανάμεσα στους πληθυσμούς. Το ποσοστό γενετικής ποικιλότητας ανάμεσα στους πληθυσμούς σε σύγκριση με τη συνολική παρατηρούμενη ποικιλότητα αντανακλά την πανμιξία δύο αρχικών πληθυσμών (γενεών), υπογραμμίζοντας την ύπαρξη μια κοινής δεξαμενής γονιδίων σε όλες τις εντατικές εκτροφές ιριδίζουσας πέστροφας στην Ελλάδα. Αυτό το γεγονός ενισχύεται και από το δίκτυο απλότυπων που δημιουργήθηκε και αποκάλυψε την ύπαρξη δύο αρχικών κλάδων σε όλο το φάσμα των εντατικών εκτροφών. Παράλληλα, η ταυτοποίηση και ποσοτικοποίηση των ελεύθερων αμινοξέων στο μυϊκό ιστό των ιχθύων διενεργήθηκε με τη χρήση Αντίστροφης Φάσης - Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Απόδοσης (Reversed Phase – High Performance Liquid Chromatography, RP-HPLC). Τα εξεταζόμενα δείγματα παρουσίασαν διαφορετικά προφίλ ελεύθερων αμινοξέων ανάλογα με τη γεωγραφική τους προέλευση. Η Ανάλυση Κύριων Συνιστωσών (Principal Component Analysis – PCA) αποκάλυψε τον σαφή διαχωρισμό των πληθυσμών μεταξύ ανατολικής και δυτικής Ελλάδας, ο οποίος ενδέχεται να οφείλεται στην ύπαρξη διακυμάνσεων στις κλιματικές συνθήκες που επικρατούν και επηρεάζουν καταλυτικά τους αβιοτικούς παράγοντες κάθε εντατικής εκτροφής. Η γεωμετρική μορφομετρία του σώματος των ιχθύων κατέδειξε την ύπαρξη σημαντικών διαφορών μεταξύ των πληθυσμών διαφορετικής προέλευσης. Η Ανάλυση Κανονικών Μεταβλητών (Canonical Variate Analysis – CVA) διέκρινε τους πληθυσμούς σε δύο ομάδες παρουσιάζοντας σε πολύ μεγάλο βαθμό ομοιότητες με τη διενεργηθείσα πληθυσμιακή γενετική μελέτη. Η διεξαγωγή των Γενικών Γραμμικών Μοντέλων (General Linear Models – GLM) δεν επέδειξε συσχέτιση των απλότυπων και της διατροφής με το σχήμα του σώματος των ιχθύων. Εντούτοις, το σχήμα του σώματος των ιχθύων παρουσίασε σημαντική συσχέτιση με τη γεωγραφική προέλευση, τη θερμοκρασία νερού, τις γεωλογικο-χημικο-κλιματικές ζώνες, την ιστιδίνη και την αργινίνη. Επομένως, η παρατηρούμενη μορφολογική διαφοροποίηση δύναται να οφείλεται στις διαφορές των αβιοτικών παραγόντων που υφίστανται μεταξύ αυτών των ζωνών όντας το αποτέλεσμα του φαινομένου της φαινοτυπικής πλαστικότητας.Συμπερασματικά, οι αβιοτικοί παράγοντες και οι συνθήκες εκτροφής διαδραματίζουν τον κυρίαρχο ρόλο σε σύγκριση με την προέλευση του γόνου. Η παρούσα διαθεματική προσέγγιση αποτελεί ένα πολύτιμο και χρήσιμο εργαλείο στην αποτελεσματική ιχνηλασιμότητα των εντατικά εκτρεφόμενων πληθυσμών ιριδίζουσας πέστροφας, έχοντας καθοριστική συνεισφορά και προάγοντας την έρευνα σε τομείς, όπως η περιβαλλοντική ανάλυση κινδύνων για την αξιολόγηση ενδεχόμενων οικολογικών επιπτώσεων που στοχεύουν στην επίτευξη της αειφορικής διαχείρισης των ιχθυοκαλλιεργειών.


Author(s):  
Shereen A Boltia ◽  
Mohammed Abdelkawy ◽  
Taghreed A Mohamed ◽  
Nahla N Mostafa

Abstract Background Stability indicating determination of pharmaceuticals is crucial, especially for drugs which have few published official analytical methods. Silodosin (SLD) is an FDA approved α1A-adrenoceptor blocker. Objective Efficient analytical methods were suggested, based on different instrumental techniques for quantification of SLD, besides conducting kinetic investigation of its degradation. Methods The first method is based on Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography with Photodiode Array Detector (RP-HPLC-PDAD). Detection is done at wavelength 225 nm. The second method is focused on using High Performance Thin Layer Chromatography (HPTLC) and eluting the drug by solvent mixture followed by scanning at wavelength 270 nm. The third method depends on the First Derivative Synchronous Fluorescence Spectroscopy (1DSFS) for analysis of solutions of SLD and its acid and oxidative induced degradation products at Δλ = 90 nm, then determining the first derivative of the spectra and measuring peak amplitudes at 360 nm. Results Acceptable linearities were found in the concentration range of 0.50–90 μg/mL, 0.10–3.0 μg/band, and 0.05–0.50 µg/mL, for RP-HPLC-PDAD, HPTLC, and spectrofluorimetric methods, respectively. Conclusion Statistical analysis showed no significant difference between the suggested and the reported method. In monitoring the kinetics of SLD degradation, the order of reactions was determined and effects of degrading agent concentration and temperature on reaction rate were studied. Highlights Three analytical methods were developed for the determination of SLD based on RP-HPLC-PDAD, HPTLC, and 1DSFS in bulk and capsule dosage form. In addition, kinetic investigation of SLD degradation was performed using the developed RP-HPLC-PDAD method.


2014 ◽  
Vol 6 (18) ◽  
pp. 7547-7553 ◽  
Author(s):  
Ping Xiao ◽  
Jianwei Chen ◽  
Xiang Li ◽  
Yayun Chen

This study demonstrated a reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) with photo-diode array detection (DAD) method for simultaneous determination of three phenylpropanoids including syringin, clemastanin B and indigoticoside A in Radix Isatidis.


2012 ◽  
Vol 1 (1) ◽  
Author(s):  
Charalampos Proestos ◽  
Athanasios Bakogiannis ◽  
Michael Komaitis

Wine contains natural antioxidants such as phenolic compounds also known as bioactive compounds. Samples of commercially available Greek wines were analyzed in order to determine this phenolic content. For the analysis, Reversed Phase-High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) coupled with a multiwavelength Ultraviolet/visible (UV/vis) detector was used. The most abundant phenolic substances detected were (+)-catechin (13.5-72.4 mg L-1 ), gallic acid (0.40-99.47 mg L-1) and caffeic acid (0.87-33.48 mg L-1). The principal component analysis (PCA) technique was used to study differentiation among wines according to their production area. Red wines contained more phenolic substances than white ones. Differences of the phenolic composition in wines of the same cultivar were investigated too.


2020 ◽  
Vol 32 (1) ◽  
pp. 28-33
Author(s):  
Yanqin Zhu ◽  
Ping Du ◽  
Shaojun Huang ◽  
Qinhong Yin ◽  
Yaling Yang

A fingerprint analysis method was established for the quality control of Moringa seed shells by high-performance liquid chromatography with diode array detection (HPLC–DAD). The HPLC–DAD separation was performed on a Thermo Hypersil Gold C18 (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) column by gradient elution with acetonitrile–water as mobile phase. The fingerprint of Moringa seed shells was established with good precision, reproducibility, and stability obtaining within 60 min, and 13 common peaks in the fingerprint were designed. Similarity analysis, principal component analysis (PCA), and hierarchical clustering analysis (HCA) were carried out to analyze the obtained fingerprints. The similarity among 11 batches of samples in addition to No. 5 and 6 was no less than 0.92. Eleven samples could be classified into 2 clusters. The HPLC fingerprint technology and application of chemical pattern recognition can provide a more comprehensive reference for the quality control of medicinal plants.


2020 ◽  
Vol 103 (3) ◽  
pp. 747-754
Author(s):  
Ibrahim A Naguib ◽  
Eglal A Abdelaleem ◽  
Fatma F Abdallah ◽  
Aml A Emam

Abstract Background Amiloride hydrochloride (AM) is a potassium sparing diuretic, while hydrochlorothiazide (HCZ) is the protype of thiazide diuretics. The combining of the studied drugs exhibits a synergistic effect. Moreover, HCZ prevents the potassium depletion side effect caused by AM. Objective Two accurate and precise simultaneous chromatographic separation methods were promoted and investigated to quantify AM, HCZ, official impurities of HCZ (cholorothiazide and salamide), and the official impurities of AM (methyl 3, 5-diamino-6-chloropyrazine-2-carboxylate). Methods The components of the quintuple mixture were quantified by two methods. The first method was high-performance thin layer chromatography (HPTLC), where exemplary separation was achieved on silica gel HPTLC F254 plates at the stationary phase using ethyl acetate–ethanol–ammonia solution (8 + 2 + 0.2, v/v) as a developing system. Scanning of bands at 273 nm was done. The second method was a reversed-phase chromatography (RP-HPLC) method using C18 (4.6 × 100 mm) column and mobile phase comprising 0.1% phosphoric acid solution–acetonitrile (90 + 10, v/v) with UV determination at 273 nm. Adjustment of the flow rate at 1 mL/min and pH at 3.6 was performed. Results Regarding RP-HPLC, optimum separation of the quintuple mixture was achieved within just five minutes. According to HPTLC, symmetric and sharp peaks were separated on the resulted chromatogram. Validity of the introduced methods was investigated by applying international conference on harmonization (ICH) guidelines. Conclusions The methods were successfully applied for assays of the studied drugs in their pure and tablet forms. No significant difference was revealed through application of statistical comparison between results of the suggested methods and those of the reported method regarding both accuracy and precision.


Author(s):  
Joyce Fagundes Souza ◽  
Antonio Mendes Nascimento ◽  
Maria do Socorro Silva Linhares ◽  
Maria da Conceição Prudêncio Dutra ◽  
Marcos dos Santos Lima ◽  
...  

The objective of this study was to evaluate the evolution of the Syrah red and sparkling Moscatel wines stored for 12 months in green, amber and clear bottles. The phenolic compounds profile and antioxidant activity in vitro were determined. Commercial wines were bottled in an automatic filling machine, stored and analyzed every three months for one year. Several phenolic compound families were quantified through reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) coupled to diode-array detection (DAD) and fluorescence detection (FD). The different bottle colors studied did not influence the evolution of the sparkling Moscatel and Syrah red wines, since the main variations obtained were related to storage time. The main changes were observed in the Syrah wine, where storage time was associated with an increase in hue (h*), decrease in catechins, increase in procyanidins and, most notably, a decrease in the anthocyanin malvidin 3-glucoside. In general, the wines showed good stability in relation to the antioxidant activity in vitro.


Sign in / Sign up

Export Citation Format

Share Document