scholarly journals Μοριακές μελέτες κατά την επίδραση της προχορήγησης του σεβοφλουράνιου στην ηπατική και πνευμονική βλάβη από ισχαιμία/επαναιμάτωση ήπατος σε μοντέλο αρουραίων

2016 ◽  
Author(s):  
Αγγελική Μικρού
Keyword(s):  
Bronchoalveolar Lavage ◽  
Reperfusion Injury ◽  
Real Time ◽  
Real Time Pcr ◽  
Bronchoalveolar Lavage Fluid ◽  
Ischemia Reperfusion Injury ◽  
Ischemia Reperfusion ◽  
Lavage Fluid ◽  
Liver Ischemia

Το σεβοφλουράνιο έχει δειχθεί ότι βελτιώνει τη βλάβη από ισχαιμία/επαναιμάτωση (ischemia/reperfusion injury, IRI) μέσω διαφόρων μηχανισμών, οι οποίοι περιλαμβάνουν τη μείωση της έκτασης της φλεγμονώδους διαδικασίας. Παρόλα αυτά, δεν υπάρχουν μέχρι στιγμής μελέτες σχετικά με τον ενδεχόμενο ρόλο του συστήματος του συμπληρώματος στον μεσολαβούμενο από σεβοφλουράνιο περιορισμό της IRI.Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν να μελετηθούν οι μοριακοί μηχανισμοί της φλεγμονής που εμπλέκονται στην προχορήγηση του σεβοφλουράνιου στην ηπατική και πνευμονική βλάβη μετά από ισχαιμία/επαναιμάτωση ήπατος (liver ischemia-reperfusion, LIR). Για το σκοπό αυτό, 50 αρσενικοί αρουραίοι Wistar μοιράστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες (n=10 η καθεμία): Τα ζώα στην ομάδα LIR αναισθητοποιήθηκαν με κεταμίνη και ξυλαζίνη και στην συνέχεια υποβλήθηκαν σε ισχαιμία του δεξιού και μέσου ηπατικού λοβού για 45 min και επαναιμάτωση για 6 h. Στα ζώα της ομάδας SEVO/LIR εκτός από την αναισθησία με κεταμίνη/ξυλαζίνη, χορηγήθηκε σεβοφλουράνιο για 30 min και ακολούθησε ισχαιμία/επαναιμάτωση ήπατος, όπως στην ομάδα LIR. Στην ομάδα SHAM/LIR τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν με κεταμίνη/ξυλαζίνη και στη συνέχεια διενεργήθηκε λαπαροτομή. Η ομάδα SHAM/SEVO περιελάμβανε αναισθησία με σεβοφλουράνιο για 30 min και στη συνέχεια λαπαροτομή. Τέλος, στην ομάδα VEN, τα ζώα έλαβαν μόνο κεταμίνη και ξυλαζίνη.Στη συνέχεια έγινε λήψη βρογχοκυψελιδικού εκπλύματος (Bronchoalveolar lavage fluid, BALF) για τον καθορισμό των κυτταρικών πληθυσμών. Επίσης, καθορίστηκαν οι παράμετροι ηπατικής λειτουργίας και τα επίπεδα του τρίτου συστατικού του συμπληρώματος, C3, στον ορό. Ακολούθως, μελετήθηκαν οι ιστολογικές διαφορές στο ήπαρ και στον πνεύμονα, καθώς και ο ιστολογικός εντοπισμός των πρωτεϊνών CASP3 και ICAM1 σε τομές των παραπάνω ιστών σε παραφίνη. Τέλος, μελετήθηκαν με τη μέθοδο της ποσοτικής RT- Real-Time PCR η έκφραση σε επίπεδο mRNA, των γονιδίων του συμπληρώματος C3 και C5, καθώς επίσης της ICAM1 και της CLU.Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης δείχνουν ότι η προχορήγηση σεβοφλουράνιου βελτιώνει σημαντικά τις παραμέτρους ηπατικής λειτουργίας (μειώνοντας τα επίπεδα ALT, AST και ALP στον ορό) και περιορίζοντας τη διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων στο BALF. Επιπλέον, σε σύγκριση με την ομάδα LIR, η μείωση στα επίπεδα C3 του πλάσματος φάνηκε σημαντικά μειωμένη στην ομάδα SEVO/LIR. Στην ιστολογική εξέταση του ήπατος και του πνεύμονα δεν παρατηρήθηκαν στατιστικά σημαντικές διαφορές στην. Παρόλα αυτά, τα επίπεδα εντοπισμού της μεμβρανικής ισομορφής της ICAM1 στο ήπαρ, τα οποία εξετάστηκαν με τη μέθοδο της ανοσοϊστοχημείας, έδειξαν σημαντική μείωση στη ομάδα SEVO/LIR, σε σχέση με την ομάδα LIR. Στον πνεύμονα αντίθετα, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές. Τα επίπεδα εντοπισμού της CASP3, τόσο στον πνεύμονα, όσο και στο ήπαρ, φάνηκαν επίσης να μην επηρεάζονται από την προχορήγηση σεβοφλουράνιου. Στην ομάδα SEVO/LIR, τα επίπεδα της έκφρασης του mRNA της ICAM1 δείχθηκαν μειωμένα στο ήπαρ. Αντίθετα, δεν παρατηρήθηκαν στατιστικά σημαντικές διαφορές στην έκφραση των mRNA των γονιδίων του συμπληρώματος C3, C5 και CLU στο ήπαρ ή στον πνεύμονα.Συνοψίζοντας, η προχορήγηση σεβοφλουράνιου φαίνεται να μειώνει τη φλεγμονώδη βλάβη που επάγεται από τη LIR, τόσο στο ήπαρ, όσο και στον πνεύμονα, το οποίο φαίνεται να μεσολαβείται, μερικώς τουλάχιστον, από το C3 και την ICAM-1. Περαιτέρω μελέτες απαιτούνται για τη διευκρίνηση των υποκείμενων μηχανισμών, καθώς και για τη διερεύνηση της δυνατότητας εφαρμογής της προχορήγησης σεβοφλουράνιου στην κλινική πράξη.

scholarly journals Inter-laboratory comparison of three different real-time PCR assays for the detection of Pneumocystis jiroveci in bronchoalveolar lavage fluid samples

2006 ◽  
Vol 55 (9) ◽  
pp. 1229-1235 ◽  
Author(s):  
Catharina F. M. Linssen ◽  
Jan A. Jacobs ◽  
Pieter Beckers ◽  
Kate E. Templeton ◽  
Judith Bakkers ◽  
...  
Keyword(s):  
Bronchoalveolar Lavage ◽  
Real Time ◽  
Real Time Pcr ◽  
Bronchoalveolar Lavage Fluid ◽  
Medical Center ◽  
Tertiary Care ◽  
Lavage Fluid ◽  
The Other ◽  
Pneumocystis Jiroveci ◽  
Pcr Assays

Pneumocystis jiroveci pneumonia (PCP) is an opportunistic infection affecting immunocompromised patients. While conventional diagnosis of PCP by microscopy is cumbersome, the use of PCR to diagnose PCP has great potential. Nevertheless, inter-laboratory validation and standardization of PCR assays is lacking. The aim of this study was to evaluate the inter-laboratory agreement of three independently developed real-time PCR assays for the detection of P. jiroveci in bronchoalveolar lavage fluid samples. Therefore, 124 samples were collected in three tertiary care laboratories (Leiden University Medical Center, Maastricht Infection Center and Radboud University Nijmegen Medical Centre) and were tested by both microscopy and real-time PCR. Of 41 samples positive for P. jiroveci by microscopy, 40 were positive in all three PCR assays. The remaining sample was positive in a single assay only. Out of 83 microscopy-negative samples, 69 were negative in all three PCR assays. The other 14 samples were found positive, either in all three assays (n=5), in two (n=2) or in one of the assays (n=7). The data demonstrate high inter-laboratory agreement among real-time PCR assays for the detection of P. jiroveci.

Real-time PCR in Bronchoalveolar Lavage Fluid in the Sputum Smear-Negative Patients Suspected of Pulmonary Tuberculosis by Chest CT

CHEST Journal ◽  
2010 ◽  
Vol 138 (4) ◽  
pp. 673A
Author(s):  
Yee Hyung Kim ◽  
Sohee Park ◽  
Cheon Woong Choi ◽  
Jee-Hong Yoo ◽  
Hong Mo Kang ◽  
...  
Keyword(s):  
Pulmonary Tuberculosis ◽  
Bronchoalveolar Lavage ◽  
Real Time ◽  
Real Time Pcr ◽  
Bronchoalveolar Lavage Fluid ◽  
Lavage Fluid ◽  
Chest Ct ◽  
Sputum Smear ◽  
Smear Negative

scholarly journals 252. Development and Evaluation of a Novel MultiCode Real-Time PCR Assay for the Detection of Pneumocystis jirovecii in Bronchoalveolar Lavage Fluid and Induced Sputum

2019 ◽  
Vol 6 (Supplement_2) ◽  
pp. S141-S141
Author(s):  
Baoming Liu ◽  
Karen C Carroll ◽  
Sean Zhang
Keyword(s):  
Bronchoalveolar Lavage ◽  
Real Time ◽  
Dna Extraction ◽  
Real Time Pcr ◽  
Bronchoalveolar Lavage Fluid ◽  
Lavage Fluid ◽  
Induced Sputum ◽  
Pneumocystis Jirovecii ◽  
Mechanical Grinding ◽  
Pcr Assay

Abstract Background Pneumocystis jirovecii is a medically important fungal pathogen responsible for opportunistic infections in immunocompromised hosts with high morbidity and mortality. Compared with standard microscopy based assays, home-brew nucleic acid amplification tests (NAAT) have emerged as sensitive tools for the diagnosis of P. jirovecii pneumonia, but their sensitivities vary depending upon selected genetic targets. Recent studies suggest that the mitochondrial small subunit (mtSSU) is a better NAAT target given its higher copy number and stable expression in the disease process. We aimed to develop and evaluate a mtSSU-targeted MultiCode real-time PCR assay that incorporates a sample processing control (SPC) and enables detection of P. jirovecii in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and induced sputum. Methods Firstly, we compared manual DNA extraction using Zymo Quick DNA kit with automated extraction using the NucliSENS easyMAG system after sample pretreatment with either FastPrep mechanical grinding or vortex-based bead beating. We then determined the mouse hepatitis virus SPC (Luminex) spike-in amount, and optimized the PCR conditions on the ABI 7500 PCR system. A new Pneumocystis mtSSU run control was generated by cloning and transforming mtSSU gene into a genetically engineered E. coli strain, and quantified with a home-brew quantitative TaqMan PCR. Lastly, the performance characteristics of the MultiCode PCR assay were determined. Results Mechanical grinding of BALF or sputum before the easyMAG based extraction was better than the other extraction protocols as evidenced by lower CT of mtSSU or SPC. Diluted SPC added to samples before DNA extraction made its CT within 31–34. With the mtSSU run control, the limit of detection of the new assay was 80 copies/mL. No cross-reactivity was found with 9 respiratory viruses, 8 bacteria or 11 fungi. The assay has high reproducibility for three-day detection of the same sample aliquots for mtSSU (CT: 30.0–30.3; CV%: 0.5–1.6) and SPC (CT: 32.1–32.2; CV%: 0.8–2.4). Conclusion We developed a novel MultiCode real-time PCR assay for detection of P. jirovecii in BALF and sputum, which demonstrated high analytical sensitivity, specificity and reproducibility and warrants further clinical validation. Disclosures All authors: No reported disclosures.

scholarly journals Long Non-coding RNA MEG3 Promotes Pyroptosis in Testicular Ischemia-Reperfusion Injury by Targeting MiR-29a to Modulate PTEN Expression

2021 ◽  
Vol 9 ◽  
Author(s):  
Jin-zhuo Ning ◽  
Kai-xiang He ◽  
Fan Cheng ◽  
Wei Li ◽  
Wei-min Yu ◽  
...  
Keyword(s):  
Reperfusion Injury ◽  
Real Time ◽  
Western Blotting ◽  
Real Time Pcr ◽  
Testicular Torsion ◽  
Ischemia Reperfusion Injury ◽  
Ischemia Reperfusion ◽  
Pten Expression ◽  
Luciferase Reporter ◽  
Quantitative Real Time Pcr

Increasing evidence shows that the abnormal long non-coding RNAs (lncRNAs) expression is closely related to ischemia-reperfusion injury (I/R) progression. Studies have previously described that lncRNA MEG3 regulates pyroptosis in various organs I/R. Nevertheless, the related mechanisms of MEG3 in testicular I/R has not been clarified. The aim of this research is to unravel underlying mechanisms of the regulation of pyroptosis mediated by MEG3 during testicular I/R. We have established a testicular torsion/detorsion (T/D) model and an oxygen-glucose deprivation/reperfusion (OGD/R)-treated spermatogenic cell model. Testicular ischemic injury was assessed by H&E staining. Western blotting, quantitative real-time PCR, MDA, and SOD tests and immunohistochemistry measured the expression of MEG3 and related proteins and the level of ROS production in testicular tissues. Quantitative real-time PCR and western blotting determined the relative expression of MEG3, miR-29a, and relevant proteins in GC-1. Cell viability and cytotoxicity were measured by CCK-8 and LDH assays. Secretion and expression levels of inflammatory proteins were determined by ELISA, immunofluorescence and western blotting. The interaction among MEG3, miR-29a, and PTEN was validated through a dual luciferase reporter assay and Ago2-RIP. In this research, we identified that MEG3 was upregulated in animal specimens and GC-1. In loss of function or gain of function assays, we verified that MEG3 could promote pyroptosis. Furthermore, we found that MEG3 negatively regulated miR-29a expression at the posttranscriptional level and promoted PTEN expression, and further promoted pyroptosis. Therefore, we explored the interaction among MEG3, miR-29a and PTEN and found that MEG3 directly targeted miR-29a, and miR-29a targeted PTEN. Overexpression of miR-29a effectively eliminated the upregulation of PTEN induced by MEG3, indicating that MEG3 regulates PTEN expression by targeting miR-29a. In summary, our research indicates that MEG3 contributes to pyroptosis by regulating miR-29a and PTEN during testicular I/R, indicating that MEG3 may be a potential therapeutic target in testicular torsion.

Sign in / Sign up

Export Citation Format

Share Document